зубр

Генная инженерия-1: создание вектора

1) Путем ультрацентрифугирования получают фракцию РНК клетки.

2) Гельэлектрофорез: молекулы помещают в гель и создают электрическое поле, в котором заряженные молекулы двигаются. Чем крупнее и разветвленнее молекула, тем медленнее она продвигается через гель. Так можно разделить фракцию РНК на отдельные молекулы.

3) Обратная транскрипция: на матрице РНК синтезируют ДНК  с помощью ревертазы (фермента, выделенного из РНК-содержащих вирусов)

4) Путем ПЦР полученную ДНК размножают.

5) Рестриктаза – это фермент, который узнает определенную последовательность ДНК (сайт рестрикции) и в этом месте разрезает ДНК, оставляя липкие концы. Рестриктаза нужна бактериям для защиты от фаговой ДНК.

К ДНК с помощью лигазы пришиваются участки, содержащие сайты рестрикции для выбранной рестриктазы. После обработки рестриктазой получается кДНК с липкими концами.

6) Плазмиды – это небольшие кольцевые молекулы ДНК, содержащие важные для бактерий гены, например, гены устойчивости к антибиотикам. Бактерии кроме основной ДНК имеют несколько десятков плазмид, могут ими обмениваться.

Плазмида обрабатывается рестриктазой. Затем к разрезанным плазмидам добавляют ДНК с липкими концами и эту смесь обрабатывают лигазой, происходит сшивание.




Еще можно почитать

Дмитрий Поздняков БИОЛОГИЯ оглавление

ЗЗУБРОМИНИМУМ: готовимся к ЕГЭ быстро

Гостевая книга (для вопросов)      На главную


© Д.В.Поздняков, 2009-2016
E-mail: pozzdd@yandex.ru